白介素27ELISA試劑盒在使用時需要注意以下事項

　　白介素27ELISA試劑盒是一種用于定量檢測樣本中IL-27濃度的試劑盒，基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。其原理是將特異性抗體包被在微孔板（或酶標板）上，加入標準品或待測樣本，樣本中的IL-27會與包被抗體結(jié)合。然后加入生物素化抗體，該抗體會與已結(jié)合的IL-27發(fā)生特異性結(jié)合。接著加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合。最后加入顯色劑底物TMB，若反應孔中存在IL-27，則HRP會使無色TMB變成藍色物質(zhì)，加入終止液后反應孔會變成黃色。在特定波長下測定反應孔的吸光度（OD值），樣本中的IL-27濃度與OD值成正比，通過繪制標準曲線即可計算出樣本中IL-27的濃度。

　　白介素27ELISA試劑盒在使用時需要注意以下事項：

　　1、試劑準備與保存

　　平衡試劑：從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應在室溫平衡至少30分鐘，使試劑的溫度與室溫一致，避免因溫度差異影響檢測結(jié)果。未用完的酶標包被板開封后應裝入密封袋中保存，防止板條受潮或污染。

　　標準品處理：標準品液配制時，要嚴格按照說明書要求進行稀釋，且稀釋后的標準品應盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，不可保存。

　　試劑混勻：使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品，混勻時要避免產(chǎn)生過多的泡沫，以免產(chǎn)生加樣上的誤差。

　　試劑保存：不同批號的試劑不要混用，且要按照說明書規(guī)定的條件保存試劑，通常需要在2-8℃冰箱內(nèi)保存。

　　2、實驗操作過程

　　樣本處理：收集的樣本應盡早檢測，若不能馬上檢測，應將標本放于-20℃保存，但需避免反復凍融。對于血清、血漿樣本，要注意抗凝劑的選擇，EDTA、檸檬酸鹽、肝素等抗凝劑可用于血漿樣本的檢測，但不同抗凝劑對檢測結(jié)果可能有一定影響，需根據(jù)實驗要求選擇合適的抗凝劑。

　　加樣：加樣時要使用一次性吸頭，避免交叉污染。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。每孔加入標準品或待測樣品的量要準確，一般為100ul左右。加樣時要將樣品加于酶標板孔底部，盡量不要觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　溫育：反應板放入恒溫箱中進行溫育時，要保持溫度恒定，一般為37℃，并按照說明書要求的時間進行溫育，如30分鐘或1小時等。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　洗滌：洗滌過程很關鍵，洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。要使用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。如果使用洗板機，需提前設置好洗滌次數(shù)和程序，確保每次洗滌都能有效去除殘留液體。

　　顯色：顯色劑要在臨用前配制，且要在避光條件下進行顯色反應，顯色時間也需嚴格控制，一般為15分鐘左右。顯色完成后應立即終止反應。

　　終止與讀數(shù)：加入終止液后要立即混勻，并在規(guī)定的時間內(nèi)（通常為30分鐘內(nèi)）用酶標儀在450nm處測吸光值。